클로닝(Cloning) 이해하기

유전 공학에서 클로닝(cloning)은 벡터를 이용하여 타겟 DNA 분자를 얻는 실험 기법을 일컫습니다. 클로닝(cloning)은 일반적으로 타겟 DNA 및 벡터(vector) 준비, ligation 및 형질전환(transformation)의 과정으로 분류될 수 있습니다.

 

DNA Cloning(클로닝) 단계 별 프로세스

 

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1. 클로닝할 DNA 절편(타겟 DNA)을 얻습니다

클로닝할 DNA는 타겟 유기체로부터 추출된 후, 단백질, RNA 및 소분자를 제거하기 위해 정제됩니다. 일반적으로 특정 DNA 서열을 증폭시키기 위해 PCR(polymerase chain reaction) 기법을 사용합니다. 그 후 정제된 DNA를 제한 효소로 처리하여 벡터와 링크될 수 있는 end를 갖는 절편을 생성합니다. 

 

2. 분리된 DNA를 적절한 벡터에 삽입합니다

타겟 DNA는 말단을 공유적으로 연결하는 효소(DNA lilgase)와 반응하여 vector에 삽입되는데, 이 결합 반응은 ligation입니다. 이렇게 타겟 DNA를 가진 벡터는 host organism에 주입될 준비가 되었습니다.

 

3. 숙주에 재조합 DNA(recombinant DNA)를 주입합니다

해당 벡터는 host organism에 삽입되는데, 이를 위해 사용되는 방법은 다양합니다. 재조합 DNA가 삽입된 호스트 셀(host cell)은 transformed cell이라고 지칭됩니다.

 

4. 형질 전환된 호스트 셀을 선별합니다

재조합 DNA를 호스트 셀에 주입하는 것은 효율이 낮은 기법 중 하나이기 때문에, 소수의 셀만이 타겟 DNA를 가지게됩니다. 따라서 성공적으로 형질 전환된 호스트 셀을 선별하는 것은 필수 과정입니다. 

 

 

5. 타겟 DNA를 포함한 호스트 셀을 배양합니다

셀이 자랄 수 있는 최적의 조건을 제공하여 타겟 유전자가 포함된 호스트 셀을 배양합니다.

 

6. 타겟 DNA를 분리한 후 타겟 DNA를 정제합니다.

호스트 셀에서 배양된 타겟 DNA를 분리한 후, 이를 정제한 후 DNA 시퀀서(DNA sequencer)를 사용하여 타겟 DNA가 맞는지 확인합니다.

 

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