Southern Blot (서던블로팅) 이해하기

 

생물학 연구에서 꼭 알아야할 기본적인 기술 중 하나가 Southern blot (Southern blotting, 서던 블로팅)입니다. Southern blot은 DNA 샘플 내 특정 DNA 서열의 검출을 위해 사용되는 기법 중 하나입니다. Southern blotting 기법에는 전기영동으로 분리된 DNA 절편을 필터 멤브레인에 transfer하는 과정과  probe hybridization을 통한 절편 검출법을 포함하고 있습니다. 

 

Southern Blot 원리

 

 

1) 샘플로부터 추출된 DNA를 제한효소로 절단합니다.

2) 절단된 DNA 절편들은 아가로즈 겔(agarose gel)에 전기영동되어 크기별로 분리됩니다. 이때 아가로즈 겔에 전류를 흘려주면 DNA 전하가 -이기 때문에 DNA 절편들이 이동하게 됩니다. 무거운 DNA 절편은 느리게 이동하고 가벼운 DNA 절편은 빠르게 이동하기 때문에 DNA가 사이즈별로 분리됩니다.

3) 겔 안에 있는 DNA가 이중 나선에서 단일 나선으로 변성됩니다.

4) 겔 위에 Nitrocelluluose 멤브레인을 위치하고, 멤브레인 전체에 동일한 압력을 가해 겔과 멤브레인이 잘 접촉할 수 있도록 합니다.

5) 멤브레인을 hybridization probe (타겟 DNA를 검출할 수 있는 특정 서열을 가진 단일 DNA 절편)에 노출시킵니다. 탐침 (probe) DNA는 검출을 위해 일반적으로 형광, 염색 또는 방사성 동위원소로 표지되어 있습니다.  

6) Nitrocellulose membrane과 probe DNA의 혼성화(hybridization)가 진행되면, 타겟 DNA 절편과 probe DNA 사이 이중 나선이 형성됩니다. 

7) 멤브레인을 X선 필름에 감광시켜 특정 DNA를 검출합니다.

 

 

 

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