단백질 분리 & 정제 솔루션, ACE 300Å HPLC Column

크로마토그래피 기술은 일반적으로 분해되거나 고유한 단백질을 분석하는데 사용됩니다. 현재 매우 다양하고 복잡한 구조, 매트릭스에서 유사한 변이체와 단백질을 분리해야할 필요성 등 많은 분석 과제가 존재합니다. 이러한 과제를 해결하기 위해서는 강력하고 효율적인 분리기술이 필요합니다.

 

역상 액체 크로마토그래피(Reversed phase liquid chromatography, RPLC)는 고유상태와 분해된 상태의 단백질과 펩타이드의 분리 및 특성화에 사용됩니다. 또한 RPLC는 질량 분광 분석법과 호환될 수 있습니다. 복잡한 단백질 분해물은  pore size가 약 100 Å인 고순도, 고성능 실리카 기반 입자가 포함된 컬럼을 사용하여 쉽게 분리될 수 있습니다. 하지만 분해되지 않은 고유 단백질의 분석은 더 넓은 pore size를 필요로합니다. 당사의 300 Å 넓은 pore 컬럼 ACE 제품은 광범위한 펩타이드, 단백질 및 기타 고분자량 생체 분자의 재현성 높은 분리를 위해 특별 설계되었습니다. 초고순도 실리카를 기반으로 한 ACE 제품은 탁월한 화학적 안정성, 피크 모양, 감도 및 컬럼 수명을 제공하여 매우 효율적인 단백질 분리를 지원합니다.

 

제품 특징

• 다공성, 솔리드 코어 및 생체분자 키트 옵션

• 광범위한 입자 크기 및 complementary phase

• 다양한 컬럼 길이의 마이크로보어(Microbore, 0.5 mm)~ 분석 ID

• 분석법 개발에 적합

• 모든 제조업체의 LC 시스템과 호환

 

 

일반적으로 물:아세토니트릴 그라디언트를 사용하고 이온 페어링 물질인 TFA를 첨가하여 단백질은 분리됩니다. 아래 Figure 1은 광범위한 scouting gradient를 바탕으로 ACE 3 C4-300의 다양한 분쟈량의 펩티드 및 단백질의 고효율 분리를 보여줍니다. 특히 주목할 점은 ACE의 인간, 소, 돼지 기원의 세 가지 인슐린 변이체를 분리하는 능력입니다. 해당 인슐린들은 약 5800 Da를 가지며 아미노산 서열만 약간 다릅니다. 그럼에도 불구하고 ACE 3C4-300은 이러한 샘플을 분리할 만큼 뛰어난 크로마토그래피 성능을 제공합니다.

 

[Figure 1]

밀접한 단백질 변이체의 분리는 단백질 분석에서 필요하며, 이러한 단백질의 향상된 해상도를 위해 더 좁은 gradient profile이 종종 사용됩니다. Figure 2는 우유 단백질 분석에서 해당 방법을 어떻게 사용할 수 있을지 보여줍니다. ACE 5C18-300에서는 더 좁은 아세토니트릴:물 gradient를 사용하여 20~30분 사이에 카제인과 락토글로불린 단백질을 용리하였습니다. ACE 컬럼의 고효율과 우수한 피크 모양은 구조적으로 한 개의 아미노산만 다른 카제인 변이체의 분리를 가능하게 합니다. 아래 예시에서, 이동상에서 TFA의 농도는 10 factor로 0.01%로 감소되었으며, 만약 MS 검출이 적용되었다면 감도가 크게 향상되었을 것입니다. 이는 ACE 실리카 표면의 높은 비활성으로 인해 가능하며, 낮은 농도의 TFA에서도 단백질의 우수한 피크 모양을 얻을 수 있습니다.

 

[Figure 2]

제품 스펙

Int.Ø×L	Catalog Number
2.1×50 mm	MDKB-3-0502
2.1×100 mm	MDKB-3-1002
2.1×150 mm	MDKB-3-1502
3.0×50 mm	MDKB-3-0503
3.0×100 mm	MDKB-3-1003
3.0×150 mm	MDKB-3-1503
4.6×50 mm	MDKB-3-0546
4.6×100 mm	MDKB-3-1046
4.6×150 mm	MDKB-3-1546

* Column format: Method development kit, Pore size: 300 Å, Particle size: 3 µm

 

관련 링크

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